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Sephadex G25葡聚糖凝胶G-25的作业原理

作者：开云kaiyun登录网页发布时间：2024-09-05 09:10:29

Sepdex G25是一种凝胶过滤介质, 运用凝胶的孔径巨细,完结不同分子量的物质的别离和纯化。以葡聚糖为基质的凝胶过滤层析介质，其作业原理主要是运用具有多孔网状结构的葡聚糖凝胶的分子筛效果，依据被别离样品中各组分相对分子质量巨细的差异进行别离。

柱平衡：将色谱柱衔接到纯化仪器上，用2-3柱体积（CV）的平衡缓冲液洗刷脱盐柱。

样品装载：增加1 mL样品，为了极大极限地延伸色谱柱的惯例运用的寿数，样品应在装载前进行弄清，例如以10000 g离心10分钟或经过0.45μm过滤器过滤。洗脱：运用不超越主张zui大流速的流速，用平衡缓冲液洗刷脱盐柱至少2 CV。

核算所需胀大介质的量（每1L柱床体积约1.15 kg沉积凝胶）。例如，关于床高为10cm的16/20柱，胀大介质的所需量为

πx（1.6/2）²×10×1.15=23.11g。在洁净的烧杯中称取23.11g介质，并参加必定量（例如，12mL）的包装溶液。拌和构成均匀的凝胶悬浮液。

2.1查看色谱柱，保证一切成分完好无缺、清洁。装置底部玻璃料，拧紧O型环，并将立柱笔直固定在铁支架上。运用水准仪查看并调整立柱使其水平。

2.2向色谱柱中参加适量的填料溶液以除掉空气。拧上底部塞子，在柱中留下1-2cm的填充溶液。

2.3运用玻璃棒沿柱内壁引导凝胶悬浮液，并接连倾倒，以最大极限地削减气泡的发生。让介质天然沉积，直到体积不再改变，此刻，介质和溶液将构成不同的层，上层彻底通明。

2.4将顶部玻璃料衔接到低压色谱体系，并以必定的流速发动泵，以铲除管道中的任何残留空气。暂停体系，将顶部玻璃料装置到柱上，玻璃料的底端高于凝胶外表约1厘米。拧紧O形环并以300-500 cm/h的流速泵送色谱柱，直到床体积不再改变。持续包装5-10分钟，并用记号笔符号凝胶外表的方位。

2.5暂停体系，拧上底部插头，断开立柱与泵的衔接，向下旋转调理杆，使其中止在符号方位下方0-0.5 cm处。拧上顶部塞子以完结柱填料。

就地清洁是为了去除变性蛋白质、脂蛋白或脂质。常用的清洗溶液包含0.2 M NaOH或非离子洗刷剂，柱应运用2-3 CV清洗。